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Agilent
xCELLigence RTCA SP
96Well Label-Free
Cellular Impedance

단일 96웰 플레이트 포맷과 Cellular Impedance 측정으로 세포 증식 및 독성 반응을 라벨 없이 실시간 정밀 모니터링

Agilent xCELLigence 실시간 세포 분석(RTCA) SP 기기는 무표지 세포 임피던스를 사용해 높은 정확도, 감도 및 재현성으로 세포 건강, 반응, 기능을 지속적으로 모니터링합니다. SP 모델은 96-well 바이오센서 마이크로플레이트(E-Plate 96)를 처리할 수 있으며, 세포 건강 특성 규명, 면역 세포 매개 사멸 작용, 바이러스 세포 변성 효과, 세포 독성, 세포 부착, 세포 장벽 기능(TEER), 세포 신호 전달(예: GPCR) 및 기타 관련 응용에 적합합니다. 이 기기는 표준 CO2 세포 배양 인큐베이터에서 작동하며 제어 유닛은 인큐베이터 외부에 장착되어 있습니다. 세포를 플레이트에 넣고 세포 행동에 대한 모니터링을 시작하기만 하면 수 초에서 수 일에 이르는 기간 동안 실시간으로 역학적 데이터를 얻을 수 있습니다. 온라인 데이터 수집 및 오프라인 데이터 분석은 RTCA Software Pro를 사용해 쉽게 수행 가능하며, 또한 FDA 21 CFR Part 11 규제 준수를 지원합니다

xCELLigence RTCA

Features

  • xCELLigence RTCA SP 모델은 1개의 96-well 플레이트를 처리할 수 있습니다.

  • 이 모델은 높은 감도, 정확도 및 재현성으로 세포 건강, 세포 생존력 또는 치료에 대한 반응을 측정합니다.

  • 비침습적 label-free 실시간 임피던스 기술로 높은 시간 분리능에서 연속 데이터를 얻을 수 있습니다(수 초에서 수 일까지). 

  • 사용자는 간편한 워크플로를 통해 사용자는 최소한의 수동 작업 시간으로 생리학적 조건에서 간단히 세포를 E-plate에 추가하고 kinetic 측정을 시작할 수 있습니다.  

  • 직관적인 RTCA Software Pro는 실시간 데이터를 분석하여, 여러 플롯 타입을 생성하고 자동으로 세포용해율, IC50 또는 KT50과 같은 파라미터를 자동으로 계산할 수 있습니다.

  • RTCA Software Pro는 전자 데이터 완전성을 보장하여 FDA 21 CFR Part 11 규제 준수를 지원합니다.

How it works

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생리적 조건에서 실시간으로 세포 행동 측정

xCELLigence RTCA 기기는 임피던스 기반 기술을 사용하여 표준 CO2 세포 배양 인큐베이터에서 수 초에서 수 일까지 세포 건강과 행동을 지속적으로 자동 측정합니다. 단순히 세포를 E-Plate에 넣기만 하면 세포 수, 증식률, 세포 크기, 모양, 세포-기질 부착을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.

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세포 임피던스 설명

고감도 실시간 세포 임피던스 분석은 E-Plate 바닥 표면에 부착된 골드 미세전극(gold microelectrodes)을 사용하여 세포 특성을 비침습적으로 측정합니다. 전극-용액 계면에 부착된 세포로 인해 전자 흐름에 방해가 생깁니다. 이 임피던스의 크기는 세포의 수, 세포 크기와 모양, 세포 장벽 기능 형성 및 세포 기질 부착 정도에 따라 다릅니다. 골드 미세전극 표면과 인가된 전위(22mV) 모두 세포 상태나 행동에 영향을 미치지 않습니다.

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간단하며 견고한 분석 워크플로

xCELLigence RTCA 워크플로는 사용자가 최소한의 시간을 들여 고감도의 정량적이며 재현 가능한 데이터를 얻을 수 있도록 합니다. 단순히 세포를 E-Plate에 넣기만 하면 세포 수, 증식률, 세포 크기, 모양, 세포-기질 부착을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다. 부착 세포로 인해 발생하는 전자 흐름의 세포 임피던스는 Cell Index라는 단위가 없는 파라미터로 보고됩니다.

How it works - Cell Impedance

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Cellular Impedance

세포 임피던스 분석의 기능 단위는 Microtiter plate well 바닥 표면에 결합된 일련의 골드 미세전극(gold microelectrodes)입니다. 전기 전도체 용액(완충액 또는 표준 조직 배양 배지)에 담그고 이러한 전극에 전위를 인가하면 전자가 음극 단자를 떠나 벌크 용액을 통과한 다음 양극 단자에 증착되어 회로가 완성됩니다.

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환원주의 생화학 어세이와 전체 유기체 체내 실험 사이에 위치한 세포 기반 어세이는 기초 및 응용 생물학 연구에 없어서는 안될 도구입니다. 그러나 다음과 같은 이유로 많은 세포 기반 어세이의 효용성이 감소합니다.

(1) 표지 사용의 필요성,

(2) 지속적 모니터링과의 비호환성(즉, 엔드포인트 데이터만 생성됨),

(3) 직교적 어세이와의 비호환성,

(4) 객관적/정량적 판독의 제공 불가.

 

그러나 이러한 각각의 단점은 비침습적, 무표지 실시간 세포 임피던스 어세이로 극복됩니다

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세포 임피던스 어세이의 기능 단위

세포 임피던스 어세이의 기능 단위는 Microtiter plate 웰 바닥 표면에 결합된 일련의 금 미세전극(gold microelectrodes)입니다(그림 1). 전기 전도체 용액(완충액 또는 표준 조직 배양 배지)에 담그고 이러한 전극에 전위를 인가하면 전자가 음극 단자를 떠나 벌크 용액을 통과한 다음 양극 단자에 증착되어 회로가 완성됩니다. 이 현상은 벌크 용액과 전극의 상호 작용으로 인해 발생하기 때문에 전극-용액 계면에 부착 세포가 있으면 전자 흐름이 방해를 받습니다. 이 임피던스의 크기는 세포의 수, 세포의 크기와 모양 및 세포-매질 부착 품질에 따라 달라집니다. 중요한 것은 금 미세전극 표면이나 인가된 전위(22mV) 모두 세포 상태나 거동에 영향을 미치지 않는다는 것입니다.

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임피던스 전극

NovoCyte Penteon 및 NovoCyte Quanteon의 유체 시스템은 뛰어난 성능을 제공하도록 설계되었습니다. 다른 유세포 분석기와 비교할 때 NovoCyte Penteon 및 NovoCyte Quanteon의 유체 일관성 및 안정성은 타의 추종을 불허합니다. 연동 펌프를 사용하는 다른 기기는 종종 유체 맥동의 영향을 받아 절대 세포 수에서 불일치와 부정확성을 초래합니다.

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그림 : 애질런트 E-Plate의 임피던스 전극. (A) E-Plate의 각 웰에 사용되는 서로 맞물린 전극을 단순화하여 나타낸 도식도. 전극은 비율에 맞게 그려지지 않았습니다(몇 개만 표시되어 있으며 이해를 돕기 위해 확대하였음). 금 전극 표면에서 세포를 시각화할 수도 있지만 웰 중간에 전극이 없는 영역에서 현미경 이미지(명시야, 형광 등)를 쉽게 얻을 수 있습니다. (B) 96-well E-Plate에서 하나의 웰을 보여주는 사진. (C) 음영 처리된 전극과 염색되지 않은 인간 세포의 확대된 명시야 이미지. (D) 복합 현미경에서 본 금 전극과 크리스탈 바이올렛으로 염색된 인간 세포.

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실시간 임피던스 트레이스 설명

부착 세포로 인한 전자 흐름의 임피던스는 세포 지수(CI)라는 단위가 없는 파라미터를 사용하여 보고되며, 여기서 CI = (시점 n의 임피던스 - 세포가 없을 때의 임피던스)/공칭 임피던스 값입니다. 그림 3은 세포 사멸 실험을 설정하고 실행하는 전체 과정에서 실시간 임피던스 트레이스의 일반적인 예를 보여줍니다. 세포가 웰에 추가된 후 처음 몇 시간 동안은 임피던스가 급격히 증가합니다. 이는 세포가 부유액에서 떨어져 전극에 침전되고 국소 부착이 형성되어 발생합니다. 초기에 추가된 세포의 수가 적고 웰 바닥에 빈 공간이 있는 경우 세포가 증식하여 CI가 점진적이지만 꾸준히 증가합니다. 세포가 합류에 도달하면 CI 값이 안정화되어 벌크 매체에 접근할 수 있는 전극 표면적이 더 이상 변하지 않는다는 사실을 반영합니다. 이 시점에서 세포 사멸 유도제를 추가하면 CI가 다시 0으로 감소합니다. 이는 세포가 둥글게 변형된 후 웰 바닥에서 분리되기 때문입니다. 이 일반적인 예는 세포가 합류할 때 약물을 첨가하는 것이지만, 임피던스 기반 어세이는 매우 유연하며 이를 통해 전극에 대한 초기 세포 부착 속도와 범위 또는 세포 증식 속도와 범위를 평가할 수도 있습니다.

 

그림 : 세포 사멸 어세이를 설정하고 실행하기 위한 일반적인 실시간 임피던스 트레이스. 임피던스 트레이스의 각 단계와 여기서 발생하는 세포 거동은 본문에 설명되어 있습니다

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임피던스와 세포 현상의 상관 관계

RTCA는 세포 수, 증식 속도, 세포 크기/모양 및 세포 매질 부착 품질 등을 정량적으로 판독합니다. 이러한 물리적 특성은 수천 개의 서로 다른 유전자/단백질의 산물이기 때문에 RTCA는 세포 건강과 거동에 대한 매우 넓은 화각을 제공할 수 있습니다. 내피 장벽 기능 및 화학주성부터 사모포체 역학 및 면역 세포 매개 세포 용해에 이르기까지 모든 것을 xCELLigence 기기에서 성공적으로 분석했습니다. 그 범위가 매우 넓음에도 불구하고 xCELLigence 어세이로 여전히 매우 특정한 생화학 및 세포 현상을 연구할 수 있습니다. 제어 및/또는 직교 기법을 적절히 사용하면 임피던스 트레이스의 특징을 특정 세포/분자 현상과 연관시킬 수 있습니다. 그 방법을 자세히 알아보고 xCELLigence RTCA 기술의 감도와 다양한 활용성을 확인하려면 여기에서 집중 조명하는 여러 특정 응용을 살펴보세요.

 

그림: E-Plate 및 xCELLigence RTCA 기기를 사용하여 얻은 실시간 임피던스 트레이스의 예. (A) 다양한 농도의 콜라겐 IV로 사전 코팅된 E-Plate 웰에 대한 A549 세포 부착의 실시간 모니터링. 임피던스 값(세포 지수)과 현미경에서 볼 수 있는 부착 세포 수 사이의 상관 관계에 주목하세요. (B) 다양한 농도의 GPCR 작용제 도파민에 노출된 HeLa 세포에 대한 실시간 임피던스 트레이스. 검정색 화살표는 도파민 첨가 시기를 나타냅니다. (C) MCF7 유방암 세포의 NK 92 세포 매개 세포 용해에 대한 실시간 임피던스 트레이스. (D) 다양한 작용 메커니즘을 보여주는 약물에 노출된 A549 세포에 대한 실시간 임피던스 트레이스.

Overview of RTCA instruments.

Applications

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Immune Cell Killing Assays

일반적인 면역 세포 사멸 분석은 노동 집약적이며 사용자가 여러 기술을 조합하여 여러 시점을 수집해야 합니다. 대조적으로, 이와 달리, 무표지 xCELLigence RTCA 기기는 면역 세포 사멸에 대한 완전한 시야를 제공하고 체내에서의 활동을 근사하게 재현합니다. 직접 측정을 통해 면역 세포 사멸 효능에 대한 높은 감도와 재현성을 획득하세요. 이러한 간단한 고처리량의 워크플로는 세포 작용 메커니즘, 연쇄 사멸 및 탈진에 대한 통찰력을 제공합니다.

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Viral Cytopathic Effect Assays

Agilent xCELLigence RTCA 기기를 통해 노동 집약적인 플라크 분석을 사용하지 않고 바이러스 세포변병효과(CPE)를 정확하게 측정함으로써 항바이러스 치료 또는 백신 개발을 진전시킵니다. 바이러스 CPE를 몇 분에서 며칠까지 자동으로 모니터링하여 시료의 워크로드와 수동 처리를 크게 줄입니다. 세포 증식 키네틱을 측정하여 다양한 세포 분주 밀도의 바이러스 감염의 최적 시점을 식별하며, 하나의 워크플로에서 바이러스 매개 세포 병원성을 평가합니다.

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Cytotoxicity Assays

세포 증식, 세포 크기 또는 형태, 세포 기질 부착 품질을 실시간으로 모니터링하여 약물이나 화합물의 세포독성 효과를 측정합니다. 처리가 빠른 이 단순한 세포 독성 분석으로 장기 세포 반응의 키네틱 특성을 모니터링하세요. 작업량을 늘리지 않고 여러 시점에서 세포 치료 타이밍에 대한 정보에 입각한 결정을 내리고 용량-반응 곡선을 쉽게 생성할 수 있습니다.

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Cell Adhesion Assays

종양이 형성되는 동안, 원발성 암은 순환 종양 세포(CTC)라고 알려진 수백만 개의 세포들을 순환되도록 방출합니다. CTC는 먼 장기에서 재부착, 분출, 전이될 수 있습니다. xCELLigence RTCA를 통해, 전이의 복잡한 기전에 대한 더 깊은 통찰력을 얻기 위해 각기 다른 세포 유형의 부착 키네틱을 지속적으로 모니터링합니다. 형광 시약 또는 염료를 사용하지 않고 실시간으로 세포 부착 및 확산을 정량적으로 평가합니다.

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Cell Signaling Assays

G 단백질 결합 수용체(GPCR), 티로신 인산화효소 수용체(RTK), 또는 핵 호르몬 매개 신호 전달은 존재하는 세포의 수, 세포의 크기/형태, 세포들이 플레이트 표면과 얼마나 긴밀하게 상호작용하는가에 영향을 미치는 생화학적 변화를 야기하곤 합니다. xCELLigence RTCA를 통해, 세포 신호 전달 이벤트에 대한 세포 크기, 모양, 증식 속도의 변화를 민감하게 포착할 수 있습니다. 지속적인 label-free 모니터링은 노출 초기 몇 분 동안의 세포 반응과 며칠에 걸친 반응의 정량적 평가를 제공합니다.

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Stem Cell Assays

줄기 세포 연구는 질병에 대한 역학적 정보를 제공하고 재생 의학의 발전을 촉진하며 신약의 효능과 효과를 테스트하기 위한 또 다른 접근 방식을 제공합니다. 기능성을 예측하고 xCELLigence RTCA를 통해 중간엽 줄기 세포(MSC)의 변동성을 평가하여 세포 치료제 생산 문제를 극복합니다. 더 적은 수의 세포를 사용하여 생산 수율을 극대화하고 세포 수, 부착, 형태의 통합적 변화를 지속적으로 측정하여 계대 간의 일관성을 보장합니다.

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Cell Barrier Function Assays

내피세포와 상피세포가 제공하는 세포 장벽 기능은 많은 질병 상태에서 제대로 발휘하지 못할 수 있습니다. 내피 세포는 혈관과 림프관의 내부 표면에 배열되어 있습니다. 상피 세포는 몸의 표면을 형성하여 외부 분자로부터 몸을 보호하는 장벽 역할을 합니다. 임피던스 기반 xCELLigence RTCA 검사는 용질 투과성 실험 및 내피 전기 저항(TEER) 실험을 포함하여 장벽 기능의 파괴를 측정하는 기존의 분석법에 대한 고감도의 정량적 대안입니다.

Literature

FAQ

  • 실시간 세포 분석(RTCA)을 통해 사용자는 비표지 라이브셀 임피던스 분석을 수행하고 세포 상태, 거동 및 기능을 지속적으로 모니터링할 수 있습니다. Agilent xCELLigence 시스템은 비침습적 바이오센서 기술을 사용하여 수 초에서 수 일까지 이어지는 분석 기간 동안 세포 특성 분석에 도움이 되는 객관적이고 감도가 높은 동역학 데이터를 제공합니다.

      

    실시간 세포 분석 기술은 세포 수, 세포 형태, 세포 기질 부착 품질, 및 세포 장벽 기능에 대한 정량적 판독 결과를 제공합니다. 세포 부착, 세포 증식, 약물/바이러스/세포 매개 세포독성, 줄기세포 분화, 세포 장벽 기능 형성/파괴, GPCR 반응, 세포 침습 및 이동을 포함한 다양한 생물학적 프로세스를 최소한의 노력으로 실시간 모니터링할 수 있습니다.

  • xCELLigence RTCA 기술을 이용하면 세포 부착, 세포 증식, 약물/바이러스/세포 매개 세포독성, 줄기세포 분화, 세포 장벽 기능 형성/파괴, GPCR 반응, 세포 침습 및 이동을 포함한 다양한 생물학적 프로세스를 실시간 모니터링할 수 있습니다. 세포 수, 세포 형태, 세포 기질 부착 품질 또는 세포 장벽 기능에 영향을 미치는 모든 세포 과정을 최소한의 노력으로 조사할 수 있으며, 분석 시간은 수 초에서 수 일까지 다양합니다.

      

    Agilent xCELLigence 시스템은 비침습적 바이오센서 기술을 사용하여 객관적인 고감도의 동역학 데이터를 제공합니다. 이를 위해 특수 마이크로플레이트 바닥에 내장된 바이오센서와의 부착 정도로부터 유도되는 비표지 세포 임피던스가 이용됩니다.

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    세포 임피던스는 웰 바닥에 통합된 골드 마이크로전극 바이오센서에 저전압 전기장을 인가하는 식으로 작동합니다. 세포가 이러한 전극에 부착되면 전극 표면 근처의 이온 흐름이 방해를 받습니다. 전극-용액 계면에 부착된 세포가 있으면 전자 흐름이 방해받아 임피던스 측정값이 변합니다. 이 변화는 세포 지수라는 단위 없는 값으로 변환됩니다.

      

    세포 지수는 [(시점 n에서의 임피던스 - 세포가 없는 경우의 임피던스)/공칭 임피던스]로 정의됩니다. xCELLigence 실시간 세포 분석은 비침습적인 비표지 실시간 세포 임피던스 분석의 기능적 출력값으로 세포 지수를 사용합니다. 임피던스 측정의 척도인 세포 지수는 특수 E-Plate에서 성장하는 세포의 수, 모양 및 부착에 비례합니다.

  • xCELLigence 시스템은 마이크로플레이트 웰(Agilent RTCA E-Plate)의 바닥면에 접합된 골드 마이크로전극 바이오센서를 사용합니다. 이 전극들은 서로 맞물린 배열로 웰 표면의 상당 부분을 덮고 있습니다. 이러한 전극에 낮은 전위(22mV)가 인가됩니다. 전극 표면에 부착된 세포는 전류 흐름을 방해하며, 이 임피던스의 크기는 세포의 수, 세포의 크기와 모양, 그리고 세포-기질 부착 정도에 따라 달라집니다. 이 기기는 이러한 임피던스의 변화를 실시간으로 측정합니다.

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  • 세포 증식은 세포가 바이오센서에 부착, 확산, 분열할 때 임피던스(세포 지수)의 증가를 모니터링하여 실시간으로 측정합니다. 세포 수 또는 부착 정도가 증가하면 측정된 임피던스 값과 그에 따라 관찰되는 세포 지수도 증가합니다. 측정이 연속적으로 이루어지므로 세포 성장의 전체 동역학적 프로파일을 포착할 수 있습니다.

  • 세포 침습 및 이동은 특수 Agilent RTCA CIM-Plate(세포 침습 및 이동)를 사용하여 측정합니다. 세포 침습 및 이동 플레이트(CIM-Plate 16)는 미세다공성 멤브레인으로 분리된 상하 챔버로 구성된 16웰 전자 집적형 Boyden 챔버입니다. 골드 바이오센서는 멤브레인 아랫면에 통합되어 있습니다. 상부 챔버에 시딩된 세포는 일반적으로 화학유인물질이 포함된 하부 챔버로 미세 다공성 멤브레인을 통과해 이동합니다. 임피던스 센서에 부착된 세포는 Agilent xCELLigence RTCA DP 기기를 통해 실시간으로 모니터링됩니다. 임피던스 변화에 따라 이동 또는 침습의 속도와 정도가 정량화됩니다. 이 분석은 비표지이며 정량적입니다.

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  • 세포 사멸은 시간 경과에 따른 임피던스(세포 지수, CI) 감소를 모니터링하여 측정합니다. 세포가 원형화, 분리, 용해와 같은 사멸 과정을 겪으면서 바이오센서와의 상호작용이 감소합니다. 세포 원형화, 분리, 용해와 같은 약물 및 면역 세포에 의한 세포 변화는 임피던스 신호의 점진적인 감소로 감지됩니다. 이러한 지속적인 모니터링을 통해 세포 사멸의 동역학을 동적으로 관찰할 수 있습니다.

  • 부착된 표적 세포의 면역 세포 사멸은 표적 세포의 임피던스 신호 감소를 통해 실시간으로 측정됩니다. 부착된 표적 세포는 임피던스 신호를 생성하는 반면, 비부착 효과 세포(NK 세포 또는 CAR T 세포 등)는 여기에 크게 기여하지 않습니다. CAR T 세포에 의해 표적 세포에서 발생하는 생화학적 및 세포적 변화는 임피던스 신호의 점진적인 감소로 감지됩니다. 이러한 감소는 표적 세포의 원형화, 분리 및 용해와 관련이 있습니다. 이 시스템을 통해 과학자들은 전체 세포 용해 과정을 동적으로 모니터링하고 시간 경과에 따른 세포 용해율을 계산할 수 있습니다. 크롬 방출 분석, LDH 방출 분석, MTT, 유세포 분석과 같은 표준 엔드포인트 분석법과 달리, RTCA 기술은 세포의 동역학적 변화를 반영하는 여러 데이터 포인트의 연속적인 시간 경과를 생성하며, RTCA 분석 완료 후 세포에 대한 직교 분석을 수행할 수도 있습니다.

  • 약물 매개 세포독성은 성장 중인 세포 배양액에 화합물을 첨가한 후 세포 임피던스 동역학적 변화를 모니터링하여 측정합니다. 세포독성 약물은 세포 증식, 크기, 형태 또는 부착 품질에 영향을 미치며, 이는 일반적으로 세포 지수의 변화(일반적으로 감소)로 측정됩니다. 세포 증식, 세포 크기 또는 형태, 그리고 세포-기질 부착 품질을 실시간으로 모니터링하여 약물 또는 화합물의 세포독성 효과를 확인합니다. 실시간 모니터링으로 약물에 대한 동역학적 반응을 포착하여 시간 의존적인 IC50 값을 계산하고, 특징적인 동역학적 패턴을 기반으로 약물 작용 기전에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

  • xCELLigence 시스템의 경우와 같은 비표지 라이브셀 분석법을 이용하면 세포 생물학이나 치료에 영향을 줄 수 있는 표지 염료나 시약 없이 세포를 더욱 생리적 상태로 유지할 수 있습니다. 또한 값비싼 시약으로 세포를 표지할 필요가 없기 때문에 경제적이기도 합니다. RTCA는 크롬 방출 분석, LDH 방출 분석, MTT 및 기타 표준 분석법과 같은 엔드포인트 분석에서 얻어지는 단일 데이터 포인트와 달리, 몇 시간 또는 며칠 동안 풍부한 데이터 포인트를 제공합니다. 이 기술은 자동화되어 있어 세포를 시딩하고 화합물을 첨가한 후에는 무인 실험이 가능하여 시간과 노력이 절약되고 직원들이 다른 작업에 집중할 수 있습니다.

  • RTCA 분석법은 크롬 51 방출 분석법과 같은 단일 엔드포인트 분석법과 달리 세포 변화를 실시간으로 지속해서 모니터링하여 시간 경과에 따른 세포 거동의 완전한 동역학적 기록을 제공합니다. xCELLigence RTCA는 비표지이고, 방사성이 없으며, 노동 집약도가 낮고, 객관적이고 정량적인 데이터를 제공합니다.

  • 다른 엔드포인트 분석법과 마찬가지로, LDH 방출 분석법은 어떤 한 시점에서의 세포 상태만 제공합니다. 이와 대조적으로, RTCA는 실시간 동적 모니터링을 제공하여 수 시간 및 수 일에 걸친 전체 동역학적 반응을 포착합니다. RTCA는 비표지이고 비침습적이며, 객관적이고 정량적인 판독 결과를 제공하고, 기존 분석법보다 수작업 시간이 단축됩니다.

  • IFNγ 방출은 면역 세포 활성화만 측정하는 반면, RTCA는 표적 암세포의 변화를 통해 면역 세포 사멸 효능을 직접 측정합니다. RTCA는 사멸 과정에 대한 실시간 연속 동역학 데이터를 제공하므로 엔드포인트 분석에서는 얻을 수 없는 사멸 속도와 정도에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. RTCA는 표적 세포와 면역 세포의 상호작용에 따른 기능적 결과를 평가하는 객관적 비표지 분석법입니다.

  • 임피던스 신호(세포 지수, 또는 CI)는 세포 수, 증식률, 세포 크기/형태, 세포-기질 부착 품질과 상관관계를 나타내는 정량적 측정값입니다. 부착, 확산, 형태 변화, 증식, 세포 사멸/용해, 심지어 심근세포 수축 등의 동적 과정과 같은 세포 상태 또는 거동의 변화는 이러한 물리적 특성에 영향을 미치며, xCELLigence RTCA 기술로 측정되는 실시간 임피던스 추적에 반영됩니다.

  • Agilent xCELLigence RTCA E-Plate는 생체 적합성 골드 바이오센서를 사용하며, 낮은 전위를 사용하기 때문에 세포에 비침습적입니다. E-Plate에 세포를 넣고 전처리 없이 모니터링하는 것이 표준 워크플로입니다. 그러나 경우에 따라 특정 세포외 기질 단백질과의 부착력 연구나 특정 세포 유형 또는 장벽 기능 분석과 같은 특정 응용 분야에는 플레이트를 미리 코팅하는 것이 유용할 수 있습니다.

  • 비부착 세포는 바이오센서와의 상호작용이 약하거나 전혀 없기 때문에 임피던스 신호에 크게 기여하지 않습니다. 면역 세포 사멸 분석은 부착 표적 세포의 사멸을 모니터링하기 위해 이렇게 NK 및 CAR T 세포의 부착력이 약한 점을 이용하며, 이 신호는 부착 표적의 상태를 반영합니다. 혈액암 세포와 같은 비부착 표적 세포는 Agilent xCELLigence Immunotherapy(IMT) 키트를 사용하여 웰 바닥에 효과적으로 고정할 수 있습니다. 이 키트는 항체를 사용하여 암세포 표면의 항원을 결합하여 모니터링을 가능하게 합니다.

  • Agilent xCELLigence 실시간 세포 분석(RTCA) 시스템은 바이러스 농도 및 세포독성 동역학을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 이 시스템은 바이러스 매개 세포용해에 대한 실시간, 비표지, 비침습적 분석을 제공하여 바이러스 세포변성효과(CPE)를 모니터링하는 강력한 도구 역할을 합니다. 염색 및 수동 계수가 필요한 기존의 플라크 분석과 달리, RTCA는 웰 바닥에 통합된 골드 미세전극 바이오센서를 사용하여 세포 변화를 동적으로 추적합니다. 이를 통해 연구자들은 높은 감도와 재현성으로 바이러스 역가와 세포독성을 평가할 수 있습니다.

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