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Agilent
NovoCyte  Quanteon
4-레이저 25-컬러
Flow Cytometer

최대 4개 레이저·25개 형광 채널 기반 차세대 고성능 다색 유세포분석기

Agilent NovoCyte Quanteon은 4개의 레이저를 갖춘 유세포 분석기로, 매우 까다로운 시료 패널 요건을 충족시키기 위해 최대 25개의 독립적인 광전자증배관을 구성할 수 있습니다. NovoCyte Quanteon에 적용된, 특허 받은 광전자증배관 기술은 탁월한 감도, 안정성 및 7.2 로그 측정 범위를 제공합니다. 매우 약한 신호와 강한 신호를 모두 같은 뷰 내에서 획득하고 게이팅할 수 있기 때문에, 노력이 많이 드는 시행착오식 검출기 조정 필요성이 사라집니다. 대규모 컬러 패널 개발 시, NovoCyte Quanteon은 설정 및 분석 시간을 절약해줍니다. 탁월한 유체 시스템이 높은 재현성 및 매우 낮은 CV를 나타내는 안정적이고 일관된 시료 전달을 제공합니다. 값비싼 비드를 사용하지 않는 절대 카운트 기능으로 시간과 비용을 절약합니다.

Agilent NovoCyte Quanteon

Features

  • 완전 자동화된 세척 및 중단 기능으로 간편하게 작동

  • NovoSampler Q를 통한 효율적인 무인 운영 자동화

  • 유연한 시료 처리는 매우 적은 양에서도 효율적인 혼합을 제공하고, 가장 대중적인 플레이트 형식, 바코드 입력 및 실험실 자동화 시스템을 위한 내장 API를 수용합니다.

  • 사용이 간편한 NovoExpress 소프트웨어는 자동 보정 기능, 세포 주기 분석 모듈, 세포 증식 모듈, 히트 맵 및 배치 통계 분석 기능 등을 갖추고 있습니다

How it works

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The Ultimate Photodetector

실리콘 광전자 증배관(SiPM)은 고체상, 실리콘 기판 기반의 광자 수준의 감도 반도체 장치로, 7.2 로그의 측정 범위를 제공합니다. 동시에 작동하는 콤팩트한 애벌랜치 광 다이오드 어레이로 구성된 SiPM은 광카운팅 기능이 있는 소형 검출기입니다. NovoCyte Penteon에 설계된 혁신적인 광학 장치는 30개의 독립적인 SiPM을 통합하여 각 형광 채널에서 신호를 획득하고 처리합니다.

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Excellent scatter resolution to detect small particles

NovoCyte Penteon 산란 검출 광학 장치 및 신호 처리 장치는 입자 크기를 0.1μm까지 분석하도록 최적화되었습니다. 이러한 우수한 분해능으로 혈소판, 박테리아 및 다양한 초미세 입자를 쉽게 식별하고 분석할 수 있습니다.

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High reproducibility and stability

NovoCyte Penteon 및 NovoCyte Quanteon의 유체 시스템은 뛰어난 성능을 제공하도록 설계되었습니다. 다른 유세포 분석기와 비교할 때 NovoCyte Penteon 및 NovoCyte Quanteon의 유체 일관성 및 안정성은 타의 추종을 불허합니다. 연동 펌프를 사용하는 다른 기기는 종종 유체 맥동의 영향을 받아 절대 세포 수에서 불일치와 부정확성을 초래합니다.

Laser combinations

비드 소모품 비용, 전압(Gain) 조절, 다색 형광 분석 등 연구원분들이 검토 시 가장 궁금해하시는 사항을 모았습니다.

  • A: 가능합니다. Agilent NovoCyte는 연구 목적과 예산에 맞춰 1~3개 레이저와 최대 17개 파라미터(형광 15채널 + FSC/SSC)를 선택할 수 있는 벤치탑 유세포분석기입니다. 일반적인 세포 생존율, 세포 주기(Cell Cycle), 형광 단백질(GFP/RFP) 분석부터 최대 13~15색 이상의 복합 면역 페노타이핑(Immunophenotyping)까지 단일 장비에서 안정적으로 소화합니다.

  • A: 수동 전압 조절 없이 즉시 측정할 수 있습니다. 7-Decade(로그)의 광범위 다이내믹 레인지를 지원하므로, 강한 형광 포화를 피하기 위해 사용자가 PMT 전압을 일일이 조절할 필요가 없습니다. 단 한 번의 런(Run)으로 매우 강한 신호부터 미세한 형광까지 노이즈 없이 동시에 검출하여 세팅 실수로 인한 샘플 손실을 원천 방지합니다.

  • A: 고감도 광학계와 저노이즈 신호 처리 시스템을 탑재하여 미약한 형광 신호도 배경 노이즈와 명확하게 분리합니다. 미세 소포체, 엑소좀과 같은 소입자 검출부터 형광 염색 강도가 약한 희귀 세포 집단까지 높은 분해능(Resolution)으로 안정적인 게이팅(Gating)이 가능합니다.

  • A: 고정밀 주사기 펌프 기반의 직접 체적 측정 방식을 통해 별도의 카운팅 비드 없이 흡입된 시료 부피만으로 정확한 절대 세포 수(Absolute Count, 세포수/μL)를 자동 도출합니다. 연구원 간 피펫팅 숙련도에 따른 오차를 제거하며, 매년 반복적으로 지출되던 수백만 원 상당의 비드 구입 비용을 영구적으로 아낄 수 있습니다.

  • A: NovoCyte 전용 NovoExpress 소프트웨어는 초보 연구원도 30분 내에 기본 워크플로우를 익힐 수 있도록 설계되었습니다. 특히 수동 설정 시 오차가 잦은 다색 분석의 형광 간섭을 ‘원클릭 자동 형광 보정(Auto-Compensation)’ 기능이 스스로 계산해 처리하므로, 연구실 내 인수인계 및 교육 부담을 대폭 줄여줍니다.

  • A: 지능형 유로 압력 감지 시스템과 자동 언클로깅(Unclogging) 및 역류 세척(Backflush) 기능을 지원합니다. 유로에 이상 압력이 발생하면 원클릭으로 이물질을 즉각 역방향 배출하며, 매 측정 전후 자동 플러싱/린스 루틴이 작동하여 노즐 막힘 스트레스 없이 연속 샘플을 측정할 수 있습니다.

  • A: 지능형 유로 압력 감지 시스템과 자동 언클로깅(Unclogging) 및 역류 세척(Backflush) 기능을 지원합니다. 유로에 이상 압력이 발생하면 원클릭으로 이물질을 즉각 역방향 배출하며, 매 측정 전후 자동 플러싱/린스 루틴이 작동하여 노즐 막힘 스트레스 없이 연속 샘플을 측정할 수 있습니다.

  • A: 지능형 유로 압력 감지 시스템과 자동 언클로깅(Unclogging) 및 역류 세척(Backflush) 기능을 지원합니다. 유로에 이상 압력이 발생하면 원클릭으로 이물질을 즉각 역방향 배출하며, 매 측정 전후 자동 플러싱/린스 루틴이 작동하여 노즐 막힘 스트레스 없이 연속 샘플을 측정할 수 있습니다.

NovoCyte 검토 가이드

Applications

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Apoptosis Assay

세포 사멸 또는 세포예정사(programmed cell death)는 세포가 죽는 방식을 조절하는 과정으로 세포를 수축, 응축하게 하는 특정 경로를 활성화하여 결과적으로 식세포작용에 의해 제거됩니다. 이는 통제할 수 없이 죽어서 분열되어 면역 반응을 활성화시키는 유해한 영향을 초래하는 괴사 세포 죽음과 뚜렷한 차이를 보여줍니다. 따라서 사멸 세포는 매우 질서있는 방식으로 죽어서 부근의 세포와 조직 파괴를 막아 줍니다.

T세포 죽음을 측정하고 세포 사멸 또는 괴사를 구별하는 다양한 방법이 있습니다. 자동 보정 설정 및 광범위한 형광 검출 측정 범위를 가진 NovoCyte 유세포 분석기를 사용하면 PMT 전압 조절이 필요 없이 이러한 분석에 대한 간편한 정량이 가능합니다.

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Immunophenotyping

면역 상태는 질병 상태, 치료 효율성 및 백신과 같은 외부 자극에 대한 반응과 관련이 있습니다. 면역 표현형 분석으로 후보 세포 유형, 하위 등급 및 기능을 신속하게 식별할 수 있습니다. 면역 세포는 백신의 면역원성과 그 효율성에 영향을 미칠 수 있으므로 다양한 면역 세포 집단의 빈도와 단핵구, NK 세포, T와 B 세포 같은 특정 세포 하위 집합의 분화 및 활성화 상태를 모니터링하는 것이 필수적입니다. NovoCyte 유세포 분석기는 여러 백혈구를 동시에 정량할 수 있어 환자의 면역 상태를 보다 잘 이해하고 전염성 질환에 대한 면역 반응을 감시할 수 있습니다

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Cell Proliferation

세포 증식은 필수 기능이며 조절되지 않을 경우 질병을 유발할 수 있는 고도로 구조화된 이벤트입니다. 절대 세포 수 또는 CFSE와 같은 염료로 증식을 측정할 수 있습니다. CFSE로 라벨링된 세포가 분할될 때, 염료는 딸세포 사이에서 균등하게 분할되고 염료가 지속적으로 희석됨에 따라 시간에 따른 CFSE 형광 손실을 측정할 수 있습니다. 또한, 염료의 평균 형광 강도(MFI)를 시간에 따른 세포 농도로 플롯하여 둘 사이의 반비례 관계를 나타냅니다. 이러한 유형의 분석은 종종 T 림프구 활성화의 변화를 관찰하는 데 사용됩니다.

 

그림: CFSE를 사용한 Jurkat T 세포의 증식 측정. A) Jurkat T 세포를 CFSE로 라벨링하고 NovoCyte 유세포 분석기에서 시간 경과에 따른 세포 분열을 측정하여 분석합니다. 각 피크는 개별 시점을 나타냅니다. B) 세포가 분열할 때 생성된 신호의 희석을 사용하여 시간 경과에 따른 CFSE의 평균 형광 강도(MFI)를 측정하는 한편, 절대 세포 수를 나타냅니다.

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Cytokine Detection

사이토카인은 병원체, 자가면역 또는 치료제에 의한 활성화에 대한 면역세포 반응에 필수적인 저분자입니다. 사이토카인에 의한 신호 전달은 유전자 조절, 선천성 면역과 적응성 면역 반응, 그리고 염증을 조절할 수 있습니다. 따라서 사이토카인 생성을 측정하고 사이토카인 생성의 근원을 확인하는 것은 면역 반응에 대한 심층적인 이해에 중요합니다. 사이토카인의 비드 기반 유세포 분석 기반 검출은 형광 강도가 다양한 비드 집단의 혼합물을 사용하여 단일 시료에서 여러 용해성 분석물을 측정하는 데 매우 효과적인 방법입니다.

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Intracellular Protein Detection

세포내 단백질의 검출 및 분석을 통해 세포 하위 집단 및 세포 과정에 대한 추가적인 특성 규명이 가능합니다. 세포 표면에 있지 않은 단백질을 분석하려면 세포 고정 및 투과화를 거쳐야 합니다. 그러나 많은 인산화 특이적인 항체는 세포내 염색에 사용되는 일반적인 세척액 기반 투과화 방법과 호환되지 않습니다. 인산화 특이적인 항체에 대한 적절한 고정 및 투과화 방법을 결정할 때 특별한 주의가 필요합니다. 가장 일반적인 방법은 고정 시 1.5% 파라포름알데히드를 사용한 다음 투과화를 위해 100% 메탄올을 사용합니다. 이 방법은 많은 항체에 적용할 수 있지만 모든 인산화 특이적인 항체에 적용할 수 있는 것은 아닙니다.

또한, 비동질성 시료에서 다양한 세포 집단을 식별하려면 표면의 단백질과 결합된 인산화 단백질을 염색해야 합니다. 이러한 에피토프의 고정제에 대한 민감성을 특별히 주의를 기울여야 하며, 에피토프를 손상시키지 않도록 예방조치를 취해야 합니다. 따라서 고정 전에 특정 표면 마커에 대해 시료를 미리 염색해야 할 수 있습니다.

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Cell Cycle Analysis

정상적인 인간 체세포는 일정한 양의 DNA를 포함하는 이배체입니다. 세포 주기가 진행되는 동안 DNA 합성으로 전체 DNA 함량이 두 배로 늘어나고 유사 분열 후 정상적인 DNA 함량을 회복합니다. NovoCyte 유세포 분석기를 사용하면 상세한 세포 주기 분석을 수행하여 종양 세포 분화, 세포 변형 및 세포 화합물 간의 상호 작용을 이해할 수 있습니다.

그림: 10µg/M MG132 또는 500µg/M 5-FI로 16시간 처리한 후, ACEA NovoCyte 유세포 분석기로 A549 세포의 세포 주기 분포를 분석했습니다. NovoExpress에 포함된 세포 주기 분석 모듈을 사용하면 플롯에 G0/G1 단계(녹색), S 단계(노란색) 및 G2/M 단계(파란색)의 세포가 표시됩니다. 일반 미처리 세포와 비교하여 MG132 처리 세포는 G2/M 단계에서 정지된 반면 5-FU 처리 세포는 G0/G1 단계에서 정지되었습니다.

Literature

FAQ

  • 유세포 분석, 세포 분리, 세포 계수는 세포 분석에 사용된다는 점에서 관련되어 있지만, 서로 다른 기술입니다. 유세포 분석기는 레이저를 통과하는 개별 세포를 검사하고 여러 가지 특성을 동시에 측정하는 분석 기기입니다. 분리 기능이 없는 이런 시스템은 세포 분석기라고 합니다.

    세포 분리기는 세포를 분석할 뿐만 아니라 특정 특성에 따라 세포를 물리적으로 분리함으로써, 유세포 분석을 한 단계 더 발전시켰다고 할 수 있습니다. 표준적인 유세포 분석기는 측정 후 세포를 관찰하고 단순히 버리는 반면, 세포 분리기는 원하는 특성을 지닌 특정 세포 집단을 분리하여 튜브나 플레이트에 분배할 수 있어 순수한 세포 집단이 필요한 연구에 매우 유용합니다.

    이와는 대조적으로, 세포 계수기는 세 가지 방법 중 가장 단순한 장치입니다. 주요 기능은 시료 내 세포 수의 파악 및 세포 생존력을 평가하는 것입니다. 세포 계수기는 보다 복잡한 분석을 실시하기 전에 세포 집단을 정량화하는 빠르고 간단한 방법을 제공하며, 많은 세포 연구의 워크플로에서 필수적인 첫 단계 역할을 합니다.  세포 계수 기능은 세포 분석기나 세포 분리기에 통합될 수 있습니다.

  • 유세포 분석기는 일반적으로 여러 가지 레이저 색상을 사용하여 다양한 형광 색소를 여기시키고 다양한 세포 특성을 동시에 분석합니다. 일반적으로 V, Y, B, R로 지칭되는 레이저 색상은 특정 파장에 해당합니다. 보통 405nm에 해당하는 보라색(V) 레이저는 퍼시픽 블루와 같은 형광 색소를 여기시키며, 다중 색상 분석을 확장할 때 유용합니다. 보통 488nm에 해당하는 파란색(B) 레이저는 FITC와 같은 일반적인 형광 색소를 여기시키는 데 사용됩니다. 노란색(Y) 레이저는 일반적으로 561nm에 해당하며, 피코에리트린(PE)과 DsRed와 같은 형광 단백질의 여기를 강화합니다.  적색(R) 레이저는 주로 635nm에 해당하며, APC와 같은 형광 색소를 여기시킵니다. 이러한 다양한 레이저 색상 덕분에 연구자들은 단일 실험에서 여러 세포의 파라미터를 분석할 수 있으며, 유세포 분석 연구의 심도와 효율성을 개선할 수 있습니다.

  • 멀티모드 마이크로플레이트 리더는 하나 이상의 검출 모드로 마이크로플레이트에서 생화학 반응을 검출하도록 설계된 광학 시스템을 갖추고 있습니다. 일반적인 검출 모드에는 흡광도, 형광 및 발광이 있습니다. 고급 멀티모드 리더 광학 장치는 시간차 형광(TRF), 시간차 형광 공명 에너지 전달(TR-FRET) 및 AlphaLisa/AlphaScreen 기술과 같은 특수 모드를 지원할 수 있습니다. 멀티모드 마이크로플레이트 리더는 광범위한 응용 분야를 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

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  • Agilent NovoCyte 유세포 분석기와 같이 자동화 가능한 유세포 분석기는 최소한의 수동 개입을 통해 유세포 분석 실험의 모든 단계를 수행할 수 있습니다. 여기에는 자동화된 시료 전처리, 로딩 및 분석은 물론 통합적인 데이터 수집 및 처리가 포함됩니다(NovoSampler Q). 이러한 시스템은 작업자의 개입 없이도 최대 24시간까지 장시간 연속 작동이 가능합니다. 일반적으로 시료의 무결성을 유지하기 위한 환경 제어, 막힘을 방지하기 위한 첨단 유체 역학 시스템, 자동 데이터 분석을 위한 정교한 소프트웨어를 갖추고 있습니다. 완전 자동화된 유세포 분석기는 실제 실험 시간을 줄이고 인적 오류를 최소화함으로써 세포 분석의 표준화와 재현성을 크게 개선하여 연구 및 임상 현장에서 귀중한 도구로 자리 잡고 있습니다.

  • Agilent NovoCyte 유세포 분석기는 4개에서 45개 이상의 파라미터를 동시에 측정할 수 있습니다.

  • Agilent NovoCyte 유세포 분석기는 PBMC, 전혈, 배양 세포(부착 및 비부착), 고형 조직의 세포, 미생물 개체군, 해양 시료, 세포외 소포체를 포함한 광범위한 시료를 분석할 수 있습니다.

  • 이벤트 속도란 주어진 시간에 기기를 통과할 수 있는 입자의 수를 말합니다. 유세포 분석기의 사양은 다양하지만, 현재 출시된 더욱 정교한 기기는 초당 최대 100,000개의 이벤트를 처리할 수 있습니다.

  • 덩어리나 죽은 세포의 파편이 없는 단일 세포의 균질한 현탁액을 준비하여 1ml당 10^6-10^7개의 세포에 해당하는 농도로 적절한 염색 완충액에 현탁합니다

  • 필요한 대조군에는 염색되지 않은 세포, 단일 염색 대조군, 2차 항체 대조군, 아이소타입 대조군 및 Fluorescence Minus One(FMO) 대조군이 포함됩니다.

  • 표적에 따라 다릅니다. 세포 내 표적의 경우, 세포를 투과시켜야 합니다. 표면 항원의 경우, 고정 및 투과는 필요하지 않습니다

  • NovoCyte 유세포 분석기는 10μL에서 5 mL까지 다양한 용량의 시료를 처리할 수 있습니다.

  • 유세포 분석기가 막히는 이유에는 일반적으로 시료 전처리 불량 및 기기 유지보수가 있습니다. 불량 높은 세포 농도, 세포 덩어리, 여과되지 않은 시료가 주요 원인입니다. 막힘을 방지하려면 항상 40μm 크기의 세포 스트레이너를 통해 세포 현탁액을 걸러내고, 1mL당 100만-1,000만 개의 세포를 유지하며, 혈청 함량이 높은 배지는 사용하지 마세요. 세포 응집을 방지하기 위해 EDTA를 첨가하고, 깨끗하고 새로운 튜브를 사용하는 등, 적절한 시료 전처리 기술을 사용하면 막힘을 크게 줄일 수 있습니다. 유체 시스템 세척 및 적절한 완충액 사용 등 정기적인 기기 유지관리는 원활한 작동을 보장하고 중요한 세포 분석 실험 중에 중단을 방지하는 데 도움이 됩니다.

  • 다중 색상 패널을 설계할 때는 강한 항원을 FITC나 Pacific Blue와 같은 비교적 어두운 형광 색소와 함께 페어링합니다. EasyPanel(Agilent NovoCyte 유세포 분석기 시스템에서 패널을 설계하기 위해 무료로 제공됨)과 같은 도구를 사용하여 유출 또는 확산을 최소화하면서 패널을 신속하게 계산하고 조정할 수 있습니다.

  • 패널 설계와 시료 전처리를 최적화하고, 적절한 대조군을 설정하며, 올바른 기기 설정을 보장합니다. 게인 및 오프셋을 조정하여 백그라운드 수준은 낮추고 신호 강도는 높입니다.

  • 높은 백그라운드 수준은 부적절한 블로킹, 세척 또는 높은 항체 농도로 인해 발생할 수 있습니다. 또한, 자가 형광이나 잘못된 보정으로 인해 발생할 수도 있습니다.

  • 신호 손실은 항체 부족, 접근 불가능한 세포 내 표적, 또는 잘못된 보정으로 인해 발생할 수 있습니다. 시료 전처리 및 기기 설정을 올바르게 수행하세요.

  • 항체를 적정할 때는 블로킹 용액을 사용하며, 강한 항원과 어두운 형광 색소를 짝지어 적절하게 보상이 이루어지도록 합니다. 일부 염색 용액도 원인이 될 수 있습니다.

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